CTC会像种子一样生根发芽
CTC检测渐趋成熟,获多个指南认可
CTC检测面前的两座大山
(一)CTC的富集方法
常见的富集方法主要有滤膜法ISET、免疫磁珠(正向、负向富集)和微流控技术。
• 滤膜法ISET:采用直径8μm滤膜来回收CTC,操作简单,成本低廉。
• 免疫磁珠正向富集:基于CTC表面抗原设计磁珠,通过免疫反应富集高纯度的CTC。
• 免疫磁珠反向富集:基于血液中的白细胞表面抗原设计抗体磁珠,通过免疫反应最大限度去除白细胞,实现最大限度保留CTC。
• 微流控技术:样本量少,可实现高通量。但目前尚处于临床验证阶段。
国内目前有两个获批的CTC富集系统,分别是华得森生物的CytoSorter®CTC检测系统和德路通循环上皮细胞采集器CellCollector。
华得森生物的CytoSorter®CTC检测系统于2021年7月份获批,是国内第一张CTCⅢ类注册证产品。
该系统基于微流控和免疫捕获技术,需与获批的配套试剂盒配合使用。在临床上用于对人外周血来源的循环上皮源肿瘤细胞进行分离富集,以及后续的细胞鉴定分析和伴随诊断的临床应用。
德路通循环上皮细胞采集器CellCollector由德国Gilupi公司研发生产,于2012年底获CE认证、2017年5月获国家药监局(NMPA)Ⅲ类认证。
该产品采用纳米涂层技术,利用抗原抗体免疫反应,从患者外周血中捕获CTC,可用于复发转移性乳腺癌患者采集外周血循环上皮细胞的监测分析。
(二)CTC的分析方法
常见的鉴定分析方法主要基于细胞表面抗原、细胞内特异基因序列和基于肿瘤细胞特异性表面叶酸抗体。
• 基于细胞表面抗原:基于CTC表面特异性抗原(EpCAM、HER2等),通过免疫荧光染色(IF),并在显微镜下观察CTC。
• 基于细胞内特异基因序列:FISH、靶向PCR、二代测序、RT-PCR、基因表达谱等。
• 基于肿瘤细胞特异性表面叶酸受体(FR):FR与标记探针结合,切下结合探针的MicroDNA进行定量扩增,通过扩增曲线计算CTC数量。
据不完全统计,世界范围内CTC检测产品目前有四五十个。
强生的CellSearch是全球首个商用的CTC检测产品,在2004年由FDA批准上市,2012年获MNPA批准。
该系统基于EpCAM的免疫磁珠正向富集CTC,采用荧光免疫技术进行分析检测,主要用于对恶性肿瘤患者进行动态监测,辅助判断疾病进程或治疗效果。
格诺生物的叶酸受体阳性CTC检测技术(以下简称FR+CTC),则是国内首个获得NMPA批准的Ⅲ类注册证的CTC检测试剂。FR+CTC于2016年获批,2020年12月成功续证,涵盖了CTC富集和分析的一体化检测试剂。
该技术基于免疫磁珠负向富集和靶向PCR技术,通过FR特异性识别,用于体外定量检测人体全血中叶酸受体阳性细胞。
叶酸是肿瘤细胞在生长增殖过程中合成DNA的必要因素,肿瘤细胞通过叶酸受体(FR)摄取叶酸。因此,各类肿瘤细胞表面抗原高表达FR。所以,可以通过FR识别肿瘤细胞。
研究表明,FR在多种癌症中高度表达,是检测的有效靶点,应用于肿瘤诊疗各个阶段。
如:乳腺癌组织的FR阳性率为32%-80%、肺癌组织中FR阳性率为78%。
经临床大数据验证,FR+CTC兼具高灵敏度和高特异性,可以提高肿瘤早期发现率,有效监测治疗及预后预测,是实现肿瘤精准诊疗非常有价值的工具。
图源:邵春奎演讲PPT
液体活检在肿瘤的早期发现和精准检测中具有极大的应用前景。CTC是目前液体活检临床研究的热点,也显示出强大的应用潜能。随着人们对CTC的研究不断深入,越来越多公司铆足干劲研发CTC产品,各种新型的CTC检测手段将不断出现。
相信在不久的将来,CTC可以翻越面前的拦路大山,成为肿瘤早筛、判断患者复发和预后价值的一大利器。